ATP含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
貨號(hào)：BC0305
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 提取液：低溫條件下，可能有結(jié)晶析出，放于60℃水浴加熱溶解即可，不影響使用。

2. 試劑二：臨用前加入3.5 mL蒸餾水充分溶解，可加熱促進(jìn)溶解，2-8℃可保存4周；

3. 試劑四：臨用前取1支加入0.2 mL蒸餾水溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融；

4. 試劑五：臨用前加入1 mL蒸餾水充分溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

5. 試劑六：臨用前取1支加入0.25 mL蒸餾水備用，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

6. 標(biāo)準(zhǔn)品：5 mg ATP。臨用前加入0.826 mL蒸餾水配成10 μmol/mL的ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

7. 工作液的配制：臨用前請(qǐng)按試劑二(mL)：試劑三(mL)：試劑四(mL)：試劑五(mL)：試劑六(mL)=0.2：0.2：0.02：0.08：0.02的比例配制（0.52mL，約10T的量），現(xiàn)配現(xiàn)用。

產(chǎn)品說(shuō)明：
ATP廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定ATP 含量并且計(jì)算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài)。

HK催化葡萄糖和ATP合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，NADPH和ATP含量成正比，以此反應(yīng)ATP含量。


技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.0026 μmol/mL
線性范圍：0.01953-3 μmol/mL

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/ 96孔UV板、研缽/勻漿器、蒸餾水、冰和氯仿。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 加入提取液離心后的上清若為渾濁為正?，F(xiàn)象。

2. 如果吸光值大于1.5，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測(cè)定。注意計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)；如果吸光值過(guò)低或接近空白，建議加大樣本量后進(jìn)行測(cè)定，注意同步修改計(jì)算公式。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g兔肺臟加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，10000g 4℃離心10min，取上清至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震蕩混勻，10000g 4℃離心3min，取上清，置冰上按照測(cè)定步驟操作，使用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.0873-0.065=0.0223，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A2標(biāo)準(zhǔn)-A1標(biāo)準(zhǔn)=0.4368-0.1435=0.2933，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：

ATP含量（μmol/g 質(zhì)量）=0.625×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.625×0.0223÷0.2933÷0.1=0.475 μmol/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，10000g 4℃離心10min，取上清至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震蕩混勻，10000g 4℃離心3min，取上清，置冰上按照測(cè)定步驟操作，使用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.5351-0.4969=0.0382，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A2標(biāo)準(zhǔn)-A1標(biāo)準(zhǔn)=0.4368-0.1435=0.2933，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：

ATP含量（μmol/g 質(zhì)量）=0.625×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.625×0.0382÷0.2933÷0.1=0.814 μmol/g 質(zhì)量。

1. 取血清0.1mL 加入1mL 提取液，充分震蕩，10000g，4℃離心10min；取上清液至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震蕩混勻，10000g 4℃離心3min，取上清置冰上，使用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算，ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.0569-0.0449=0.012，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A2標(biāo)準(zhǔn)-A1標(biāo)準(zhǔn)=0.4368-0.1435=0.2933，按液體體積計(jì)算含量得：

ATP含量(μmol/mL) =6.875×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=6.875×0.012÷0.2933=0.281 μmol/mL。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Meixi Peng,Dan Yang,Yixuan Hou,et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease. March 2019;(IF5.959)

2. Yang Wang,Jianhang Jiao,Shanyong Zhang,et al. RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury. Biomedicine & Pharmacotherapy. August 2019;116.(IF3.743)

3. Luo M,Luo Y, Mao N,et al. Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell

Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication. Cellular Physiology
and Biochemistry. November 2018;
參考文獻(xiàn)：

1. Lin X, Wu Y, Chen X, et al. Determination of adenosine phosphate in tobacco leaf by UPLC with phenol-TEA pretreatment [J]. Acta Tabacaria Sinica, 2014, 20(1): 26-31.

2. Beutler E, Mathai C K. A comparison of normal red cell ATP levels as measured by the firefly system and the hexokinase system[J]. Blood, 1967, 30(3): 311-320.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0060/BC0065   Na⁺k⁺-ATP酶活性檢測(cè)試劑盒
BC0960/BC0965   Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活性檢測(cè)試劑盒
 

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