血清淀*酶（AMY）活性檢測試劑盒（碘-淀粉比色法）說明書

微量法

貨號：BC5055

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：臨用前加入12.5mL試劑二，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌粉劑至溶解；用不完的試劑2-8℃保存1個月。

2、 試劑三的配制：將試劑三A倒入試劑三B中，用蒸餾水定容至10mL，2-8℃避光保存一個月。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg淀粉標(biāo)準(zhǔn)品。臨用前加10mL試劑二，置于常溫水中并加熱至煮沸，配成1mg/mL淀粉標(biāo)準(zhǔn)液。用不完的試劑2-8℃保存1個月。

產(chǎn)品說明：

血清淀*酶( Serum amylase， AMY) 屬于α-淀*酶，以無規(guī)則方式水解多糖分子內(nèi)部的α-1,4糖苷鍵，生成寡聚糖、麥芽糖和葡萄糖的混合物。AMY主要由唾液腺和胰腺分泌，另外近端十二指腸、肺、子宮、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。

AMY催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解，產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖以及糊精等，碘可以與未被水解的淀粉結(jié)合，生成在570nm下有特征吸收峰的復(fù)合物，其深淺可計算出淀*酶的活力單位。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

酶標(biāo)儀/可見分光光度計、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提取

取40μL血清和160μL蒸餾水混合（即將血清稀釋5倍），分為2管100μL分別作為測定管和對照管。若實驗后所測數(shù)值偏大或者偏小，可以調(diào)整稀釋比例（比如數(shù)值偏小可以將80μL血清和120μL蒸餾水混合即將血清稀釋2.5倍）

二、測定步驟和加樣表

分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到570 nm，蒸餾水調(diào)零。

將淀粉標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

按操作表依次加入各試劑：

混勻后吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中，于15min內(nèi)讀取測定管、對照管、空白管1、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管2 在570nm下的吸光度，分別記為A測定、A對照、A空白1、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白2，計算ΔA測定=（A空白1-A空白2）-（A測定-A對照），ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白2。

三、AMY活性計算

1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程y=kx+b。將ΔA測定帶入方程得到x（mg/mL）。

2、按照血清體積計算：

單位定義：每mL血清每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

AMY活性 (U/mL)= x×V樣÷V樣÷T×F =0.1×x×F

V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；T：反應(yīng)時間，10min；F：稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1. ΔA測定大于1.5時，可以對樣本進行適當(dāng)稀釋后測定。

2. 反應(yīng)完成后需在15min內(nèi)測定吸光度。

實驗實例：

1、 取40μL牛血清和160μL蒸餾水混合（即血清稀釋5倍）后，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定= A空白-（A測定-A對照）=（1.409-0.067）-（1.297-0.058）=0.103，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.6047x-0.0165，計算x=0.0459，按公式計算活性：

AMY（U/mL）= x×V樣÷V樣÷T=0.1×x×F=0.1×x×F =0.0230 U/ mL。

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