土壤中性木聚糖酶（S-NEX）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

微量法

貨號(hào)：BC5735

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg木糖。臨用前加入667μL蒸餾水配制成100μmol/mL的木糖標(biāo)準(zhǔn)液，2-8℃保存8周。

產(chǎn)品說(shuō)明：

土壤中性木聚糖酶（Soil neutral xylanase, S-NEX），又稱為土壤中性半纖維素酶，主要分離自最適生長(zhǎng)pH為6-8的微生物。

在中性環(huán)境中，S-NEX催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計(jì)算S-NEX活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機(jī)、水浴鍋、研缽、30~50目篩、蒸餾水。

操作步驟：具體的操作步驟請(qǐng)見(jiàn)“產(chǎn)品資料"文件

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。

二、測(cè)定步驟

1、 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm，分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：臨用前將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋為2、1.5、1.2、1、0.8、0.4、0.2μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：

備注：實(shí)驗(yàn)中每管需要150μL。

4、 樣本測(cè)定（在EP管中加入下列試劑）

注意事項(xiàng)：

1. 若樣本ΔA<0.01，可適當(dāng)增大樣本量或者延長(zhǎng)50℃反應(yīng)時(shí)間后測(cè)定；若樣本ΔA>1.5或者A測(cè)定＞1.5時(shí)，可用蒸餾水稀釋上清液后測(cè)定，注意同步修改計(jì)算公式中的稀釋倍數(shù)。

2. 建議使用螺旋管，防止沸水浴過(guò)程中蓋子爆開(kāi)，改變反應(yīng)體系。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、 取0.05g野蘑菇土，按操作表進(jìn)行第一步反應(yīng)2h后，取上清液用蒸餾水稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定- A對(duì)照=0.891-0.200=0.691，帶入標(biāo)曲y=0.7418x-0.2302（R²=0.9992），計(jì)算x=1.242，按樣本質(zhì)量計(jì)算S-NEX活性得：

S-NEX活性（U/g 土樣）= 0.15× x÷W×F =7.452 U/g 土樣。

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