北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC4570-50T/24S
更新時間：2024-04-17
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：986
010-50973130
產(chǎn)品分類
α-淀*酶（α-AL）活性檢測試劑盒（碘-淀粉比色法）說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC4570
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體10mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前加入12.5mL試劑三，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌粉劑至溶解，用不完的試劑2-8℃保存8周；
2、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg淀粉標(biāo)準(zhǔn)品。臨用前加10 mL試劑三，置沸水浴中振蕩溶解，配成1 mg/mL淀粉標(biāo)準(zhǔn)液，2-8℃保存四周。
產(chǎn)品說明：
淀*酶負(fù)責(zé)水解淀粉，包括α-淀*酶和β-淀*酶。α-淀*酶(EC 3.2.1.1)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時使淀粉的粘度降低，因此又稱為液化酶。
α-淀*酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解，產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖以及糊精等，碘可以與未被水解的淀粉結(jié)合，生成在570nm下有特征吸收峰的復(fù)合物，其深淺可計(jì)算出淀*酶的活力單位。α-AL耐熱，但是β-淀*酶可在70℃鈍化15min。因此粗酶液經(jīng)過70℃鈍化15min，就只有α-AL能夠催化淀粉水解。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、組織：稱取約0.1g樣本，加1mL蒸餾水勻漿；勻漿后在室溫下放置提取15min，每隔5min振蕩1次，使其充分提取；6000g，室溫離心10min，吸取上清液即為淀*酶原液。
2、液體：直接檢測。（若有渾濁則離心后進(jìn)行測定）
二、測定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至570nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將淀粉標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶
液。
序號 | 稀釋前濃度（mg/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
1 | 1 | 200 | 800 | 0.2 |
2 | 0.2 | 500 | 500 | 0.1 |
3 | 0.1 | 500 | 500 | 0.05 |
4 | 0.05 | 500 | 500 | 0.025 |
5 | 0.025 | 500 | 500 | 0.0125 |
6 | 0.0125 | 500 | 500 | 0.00625 |
7 | 0.00625 | 500 | 500 | 0.003125 |
8 | 0.003125 | 500 | 500 | 0.0015625 |
實(shí)驗(yàn)中每個標(biāo)準(zhǔn)管需250µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3、 按操作表依次加入各試劑：
測定管 | 對照管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 標(biāo)準(zhǔn)空白管 | |
α淀*酶原液 | 250 | 250 | - | - | - |
蒸餾水 | - | - | 250 | - | 250 |
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | - | - | - | 250 | - |
70℃水浴15min左右，冷卻 | |||||
試劑一 | 250 | - | 250 | - | - |
蒸餾水 | - | 250 | - | 250 | 250 |
在40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫10min | |||||
試劑二 | 125 | 125 | 125 | 125 | 125 |
蒸餾水 | 375 | 375 | 375 | 375 | 375 |
混勻后于570nm處讀取測定管、對照管、空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度，分別記為A測定、A對照、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)和A標(biāo)準(zhǔn)空白，計(jì)算ΔA測定=A空白-（A測定-A對照），ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白。空白管和標(biāo)準(zhǔn)曲線只需做1-2次。
三、α-淀*酶活性計(jì)算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，mg/mL）。
2、α淀*酶活性的計(jì)算：
（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活力單位。
α-淀*酶活性 (U/g 質(zhì)量)=x×V樣÷(W×V樣÷V樣總)÷T=0.1×x÷W
（2）按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。
α-淀*酶活性 (U/mg prot)=x×V樣÷（V樣×Cpr）÷T=0.1×x÷Cpr
（3）按照液體體積計(jì)算
單位定義：每mL液體每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。
α-淀*酶活性 (U/mL)=x×V樣÷V樣÷T=0.1×x
V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25mL；V樣總：樣本總體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，10min。
注意事項(xiàng)：
吸光值大于1.2或者ΔA大于0.8 時，可以對樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后測定。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1. 取約0.1g藜葉片，加1mL蒸餾水勻漿，勻漿后在室溫下放置提取15min，每隔5min振蕩1次，使其充分提?。?/span>6000g，室溫離心10min，吸取上清液，之后按照測定步驟操作，測得計(jì)算ΔA測定=A空白-（A測定-A對照）=0.915-（0.703-0.176）=0.388，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.1736x+0.0057，計(jì)算x=0.176，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
α-淀*酶活性 (U/g 質(zhì)量)=0.1×x÷W=0.176 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC4580/BC4585 β-淀*酶（β-AL）活性檢測試劑盒（碘-淀粉比色法）
α-淀*酶活性檢測試劑盒 淀粉系列 α-淀*酶活性檢測試劑盒 淀粉系列
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