北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC4370-50T/24S
更新時間：2024-04-16
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1157
010-50973130
產(chǎn)品分類
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植物中酰脲含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC4370
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液A液 | 液體30 mL×1瓶（自備） | 常溫保存 |
提取液B液 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 粉劑×2瓶 | -20℃保存 |
試劑六 | 液體50 mL×1瓶（自備） | 常溫保存 |
試劑七 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、提取液A液：自備無水乙醇；
2、試劑五：臨用前取1瓶加入5 mL蒸餾水溶解備用，可分裝后-20℃保存，-20℃保存一周；
3、試劑六：自備濃鹽酸；
4、標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg尿*素。臨用前加入632.5 μL蒸餾水配制成100 μmol/mL酰脲標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明：
選育高固氮活性豆科植物品種是提高豆科植物固氮能力的一個有效途徑。豆科植物根瘤菌固氮的最初輸出產(chǎn)物主要是酰脲（尿*素和尿囊酸）。酰脲是豆科植物一根瘤菌共生固氮中的氮代謝產(chǎn)物，是氮素貯藏和運(yùn)輸?shù)闹饕问剑诙箍浦参锏x中起著重要作用。可通過測定豆科植物組織中酰脲的含量，從而評估其固氮能力。
尿*素在過酸或堿條件下水解產(chǎn)生乙醛酸，然后在*和強(qiáng)酸條件下可被氧化，生成紅色絡(luò)合物，在535 nm處有特殊吸收峰，據(jù)此可由吸光值計算出樣本中酰脲的含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、鼓風(fēng)烘箱、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、30~50目篩、研缽、冰和蒸餾水、無水乙醇、濃鹽酸和EP管。
操作步驟：
一、 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)
植物樣本：將供試的植物樣本在65℃的鼓風(fēng)烘箱中烘干，研磨成粉狀，過30~50目篩。按質(zhì)量（g）︰提取液體積（mL）1︰10~20比例（建議稱取0.1 g烘干樣本，依次加入1.0 mL提取液A與1.0 mL提取液B，禁止將提取液A與提取液B混勻待用），漩渦混勻，在80℃水浴鍋中萃取5 min，然后3500 rpm，室溫，離心15 min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至535 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑六與試劑七置于冰水浴中預(yù)冷30 min以上，并置于冰上待用。
3、 標(biāo)準(zhǔn)液的處理：將標(biāo)準(zhǔn)品配制成100 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液后，用蒸餾水稀釋至12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125 nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
4、 操作表：（在1.5mL EP管中操作）
對照管 | 尿囊酸測定管 | 酰脲測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
樣本（µL） | 400 | 400 | 400 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液（µL） | - | - | - | 400 | - |
蒸餾水（µL） | - | - | - | - | 400 |
試劑一 （µL） | 50 | - | 50 | 50 | 50 |
試劑三（µL） | - | 100 | - | - | - |
- | 充分混勻，沸水浴7 min，冷卻至室溫。 | ||||
試劑二（µL） | 50 | - | 50 | 50 | 50 |
- | 充分混勻，100℃水浴加熱6 min，冷卻至室溫 | ||||
試劑四（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
試劑五（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
充分混勻，室溫下靜置6 min，然后轉(zhuǎn)移至冰水浴中，冷卻至4℃ | |||||
試劑六（µL） | 500 | 500 | 500 | 500 | 500 |
試劑七（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
充分混勻，室溫下靜置15 min | |||||
取1 mL反應(yīng)液，于1 mL玻璃比色皿中測定535 nm處吸光值A，分別記為A對照管、A尿囊酸測定管、A酰脲測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管及A空白管。計算ΔA尿囊酸=A尿囊酸測定管-A對照管，ΔA酰脲=A酰脲測定管-A對照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。 | |||||
注意：對照管不進(jìn)行水浴加熱處理；尿囊酸測定管只需進(jìn)行第二次的沸水?。粶y定管、標(biāo)準(zhǔn)管及空白管在沸水浴加熱時，EP管蓋緊并用封口膜密封，避免液體蒸發(fā)影響試驗數(shù)據(jù)。
三、植物中酰脲含量的計算
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，其對應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y= kx+b，將ΔA尿囊酸和ΔA酰脲分別帶入方程得到x1（nmol/mL）和x2（nmol/mL）。
2、 豆科植物中酰脲含量的計算：
尿囊酸含量（nmol/g 質(zhì)量）= x1×V提取÷W=2×x1÷W
酰脲含量（nmol/g 質(zhì)量）= x2×V提取÷W=2×x2÷W
V提取：加入提取液體積，2.0 mL；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項：
1、同一批檢測樣本需配1-2個空白管。
2、當(dāng)OD值高于0.9時，建議將樣本稀釋后檢測，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、試劑六與試劑七在使用之前請先置于冰上預(yù)冷30 min以上。
實驗實例：
1、取0.1g馬齒莧，進(jìn)行樣本處理，按照測定步驟操作，測定計算ΔA酰脲=A酰脲測定管-A對照管=0.559-0.385=0.174，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0708x+0.0059，計算x2=2.3743，按照計算公式計算得：
酰脲含量（nmol/g 質(zhì)量）= x2×V提取÷W=2×x2÷W=2×2.3478÷0.1=47.486 nmol/g 質(zhì)量。
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