有效期
6個月
儲存條件
-20℃
中文名稱
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)活性檢測試劑盒
單位
盒
英文名稱
Granule-Bound Starch Synthase（GBSS）Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
25T/24S ; 50T/48S

產(chǎn)品型號：BC3290

更新時間：2024-04-24

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1124

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

結(jié)合態(tài)淀粉合成酶（GBSS）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC3290
規(guī)格：25T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二A	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑二B	粉劑×1支	-20℃保存
試劑二C	粉劑×1支	-20℃保存
試劑三A	液體5mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三B	粉劑×1支	-20℃保存
試劑四	液體16μL×1支	2-8℃保存
試劑五A	液體8mL×1瓶	2-8℃保存
試劑五B	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑五C	粉劑×1支	2-8℃保存
試劑六	粉劑×2支	-20℃保存
試劑七	粉劑×1支	-20℃保存

溶液的配制：

試劑二：臨用前取試劑二A加入8 mL試劑一，緩慢加熱，逐漸升溫使其溶解，冷卻后加入試劑二B和試劑二C混合溶解，這樣可以分兩批配制并且測定，用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融。
試劑三：臨用前試劑三B加入試劑三A溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融。
試劑四：臨用前先離心，取7 μL試劑四加入2.24 mL溶解好的試劑三混合備用（約14T），現(xiàn)用現(xiàn)配，也可根據(jù)樣本量按比例配制。
試劑五：臨用前取試劑五B和試劑五C加入試劑五A中溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融。
試劑六：臨用前取1支加入208 μL蒸餾水充分溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融。
試劑七：臨用前加入2mL蒸餾水，用不完的試劑-20℃分裝保存8周，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說明：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束縛態(tài)存在于淀粉體中，催化淀粉鏈的加長反應(yīng)，主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。
GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時生成ADP；進一步通過反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP⁺還原為NADPH，其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比，通過340nm下測定NADPH的增加量，可以計算GBSS活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混勻，置冰上待測。
二、測定步驟

紫外分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
在EP管中按順序加入下列試劑

試劑名稱（μL）	測定管
樣本	200
試劑二	270
渦旋混勻，30℃保溫20min，置沸水浴中1min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻。
試劑四	150
渦旋混勻，30℃保溫30min，置沸水浴中1min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻，10000g，常溫離心10min，取上清液待測。37℃預(yù)熱試劑五和上清液。
上清液	450
試劑五	300
試劑六	15
試劑七	15

混勻后立即在340nm波長下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。
注意：試劑二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。
三、GBSS活性計算
1、按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
GBSS活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V測]÷(Cpr×V樣÷V反總×V上清) ÷T =43.2×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本質(zhì)量計算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
GBSS活性（U/g 質(zhì)量）=[ΔA÷（ε×d）×V測]÷(W÷V提取×V樣÷V反總×V上清) ÷T=43.2×ΔA÷W
V測：測量體積，0.78mL；V反總：反應(yīng)體積，0.62mL；V提取：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，20min；ε：NADPH消光系數(shù)，6.22×10^-3mL/(nmol^.cm)；d：石英比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本的量，0.2mL；V上清：吸取上清液的量，0.45mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
實驗實例：

取0.1g肝臟加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混勻，置冰上，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A2-A1=0.19-0.178=0.012，按樣本質(zhì)量計算：GBSS活性（U/g 質(zhì)量）=43.2×ΔA÷W=5.184 U/g 質(zhì)量。
取0.1g柳樹加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混勻，置冰上，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A2-A1=1.919-1.915=0.004，按樣本質(zhì)量計算：GBSS活性（U/g 質(zhì)量）=43.2×ΔA÷W=1.728 U/g 質(zhì)量。

參考文獻：

Jiang H, Dian W, Wu P. Effect of high temperature on fine structure of amylopectin in rice endosperm by reducing the activity of the starch branching enzyme[J]. Phytochemistry, 2003, 63(1): 53-59.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0700/BC0705 淀粉含量檢測試劑盒
BC1850/BC1855 可溶性淀粉合成酶（SSS）活性檢測試劑盒
BC1860/BC1865 淀粉分支酶（SBE）活性檢測試劑盒