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當前位置:首頁產品中心生化檢測試劑盒-常量法光合作用系列BC3400-50T/48SPFP試劑盒 光合作用

PFP試劑盒 光合作用
產品簡介:

儲存條件
-20℃
中文名稱
PFP試劑盒 光合作用
有效期
6個月
單位

英文名稱
Pyrophosphate: Fructose-6-Phosphate-1-Phosphoric Acid Transferase(PFP) Activity Assay Kit
別名
焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸轉移酶(PFP)試劑盒 焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸

產品型號:BC3400-50T/48S

更新時間:2025-08-26

廠商性質:生產廠家

訪 問 量 :1691

服務熱線

010-50973130

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產品介紹

焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸轉移酶PFP活性檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法

注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號BC3400

規(guī)格50T/48S

產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液

液體55 mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體40 mL×1

2-8℃保存

試劑二

粉劑×1

-20℃保存

試劑三

粉劑×1

-20℃保存

試劑四

液體×2

2-8℃保存

試劑五

液體×2

-20℃保存

試劑六

液體60 μL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 試劑二:臨用前加6 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存兩周,禁止反復凍融。

2、 試劑三:臨用前加6 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存兩周,禁止反復凍融。

3、 試劑四:臨用前1加入0.3 mL蒸餾水溶解備用,2-8℃保存一周。

4、 試劑五:臨用前1加入0.3 mL蒸餾水溶解備用,-20分裝保存一周,禁止反復凍融。

5、 試劑六:臨用前加入0.6 mL蒸餾水溶解備用,2-8保存一周,也可按比例現(xiàn)用現(xiàn)配。

產品說明:

焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸轉移酶(PFPEC2.7.1.90)是一種胞質酶,廣泛存在于植物組織中,與磷酸果糖激酶一樣催化果糖-6-磷酸的磷酸化,單PEP催化反應為可逆反應,并以焦磷酸代替ATP,在光合作用碳代謝中起重要作用。

PFP催化6-磷酸果糖轉化為1,6-二磷酸果糖,它在醛縮酶和磷酸丙糖異構酶的作用下轉變?yōu)榱姿岫u丙 酮,再由α-磷酸甘油脫氫酶和NADH 催化生成3-二磷酸甘油和NAD,340nm處的吸光度變化反映了PFP的活性的高低。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1 mL石英比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

1、組織:按照質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1 g,加入1 mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,20000 g離心15 min,取上清置冰上待測;

2、細胞:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1 mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300 W,超聲3 s,間隔7 s,總時間3 min);然后4℃,20000 g離心15 min,取上清置冰上待測;

3、液體:直接檢測。

二、測定步驟

1、 分光光度計預熱30 min以上,調節(jié)波長至340 nm,蒸餾水調零。  

2、 操作表:

試劑名稱(μL

測定管

空白管

試劑一

670

670

試劑二

100

100

試劑三

100

100

試劑四

10

10

試劑五

10

10

試劑六

10

10

樣本

100

-

蒸餾水

-

100

充分混勻于1 mL石英比色皿中測定37℃條件下,340 nm處初始值A130 min的吸光值A2,分別記為A1測定管、A1空白管、A2測定管,A2空白管。計算 ΔA= A1測定管-A2測定管)-A1空白管-A2空白管)。

注:也可將試劑一、二、三、四、五、六按操作表比例,配制成工作液,現(xiàn)配現(xiàn)用;空白管只需做1-2次。

三、焦磷酸:果糖6-磷酸-1磷酸轉移酶活性的計算

1)按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。

PFPU/mg prot=ΔA÷ε×d×V反總×109÷(V×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr

2)按照樣本質量計算

酶活單位定義:每克組織每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。

PFPU/g 質量)=ΔA÷ε×d×V反總×109÷(W×V÷V提取) ÷T=53.59×ΔA÷W

3)按照細胞數(shù)量計算

酶活單位定義:每104個細胞每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。

PFPU/104 cell= ΔA÷ε×d×V反總×109÷(V×細胞數(shù)量÷V提取) ÷T=53.59×ΔA÷細胞數(shù)量

4)按照液體體積計算

酶活單位定義:每毫升液體每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。

PFPU/mL=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V÷T=53.59×ΔA

V反總:反應體系總體積,0.001 L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1 cmV樣:加入樣本體積,0.1 mLV提?。杭尤胩崛∫后w積,1 mL;T:反應時間,30 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;109換算系數(shù),1mol=109 nmol

 

注意事項:

1、每次檢測樣本數(shù)不宜太多以免耽誤過多的酶促反應時間。

實驗實例:

1、0.1g豆芽進行樣本處理,取上清后按照測定步驟操作,測得計算 A1測定管-A2測定管=1.041-0.963=0.078、A1空白管-A2空白管=0、ΔA=A1測定管-A2測定管)-A1空白管-A2空白管)=0.078,按照樣本質量計算酶活得:

PFPU/g 質量)=ΔA÷ε×d×V反總×109÷(W ×V÷V提取) ÷T=53.59×ΔA÷W=41.8 U/g 質量

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