NADPH-細*色素C還原酶活性測試盒常量

產(chǎn)品簡介：

NADPH-細*色素C還原酶活性測試盒常量
有效期
6個月
儲存條件
-20℃
單位
盒
英文名稱
NADPH-cytochrome C Reductase（NCR）Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號：BC2720-50T/48S

更新時間：2025-08-26

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：2015

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

NADPH-細*色素C還原酶（NCR）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號：BC2720

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
試劑一	粉劑×2瓶	2-8℃保存
試劑二	液體80mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×2瓶	-20℃保存
試劑四	粉劑×2支	2-8℃保存

溶液的配制：

1、試劑一：臨用前取一瓶加入50mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑2-8℃保存可保存4周；

2、試劑三：臨用前取一瓶加入1.3mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融。

3、試劑四：臨用前取一支加入275μL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說明：

細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用，尤其是藥物和毒物的代謝。NCR作為P450酶系的重要一員，催化氧化型P450還原再生。

NCR催化NADPH還原氧化型細*色素C，還原型細*色素C在550nm處有特征吸收峰；通過測定550nm吸光度的增加速率，來計算NCR活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、低溫離心機、超速離心機、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提?。蛇m當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1、除去細胞核和線粒體等：稱約0.5g組織，加入4℃預(yù)冷的1mL試劑一，冰上充分研磨，10 000g，4℃離心30min，取上清液，轉(zhuǎn)移到超速離心管中。

2、粗制微粒體：4℃，100 000g，離心60min，棄上清液。

3、除血紅蛋白等雜質(zhì)：向步驟2的沉淀中加1mL試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g離心30min，棄上清液。

4、最終微粒體：向步驟3的沉淀中加0.5mL試劑二，蓋緊后充分震蕩溶解，即粗酶液，置于冰上待測。

二、測定步驟

1、可見分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至550nm，蒸餾水調(diào)零。

2、臨用前根據(jù)實驗用量取出部分試劑二在37℃水浴中預(yù)熱30min。

3、空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入50μL蒸餾水、900μL試劑二、50μL試劑三和10μL試劑四，迅速混勻后于550nm處測定2min內(nèi)吸光值變化，測定第10s和第130s吸光值，分別記為A1、A2。計算ΔA空白=A2-A1。空白管只需做1-2次。

4、測定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入50μL粗酶液、900μL試劑二、50μL試劑三和10μL試劑四，迅速混勻后于550nm處測定2min內(nèi)吸光值變化，測定第10s和第130s吸光值，分別記為A3、A4。計算ΔA測定=A4-A3。

三、NCR活性計算

1、按蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃條件下，每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol還原型細*色素C為1個酶活單位。

NCR (U/mg prot)= (ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總÷（Cpr×V樣）÷T

= 0.529×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：37℃條件下，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol還原型細*色素C為1個酶活單位。

NCR (U/g 質(zhì)量)= (ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T

=0.265×(ΔA測定-ΔA空白)÷W

ε：還原型細*色素C摩爾消光系數(shù)，19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1010μL=0.00101L；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；V樣：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積，50μL=0.05mL；V樣總：樣本處理中最后加入試劑二體積，0.5mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，2min。