Western blotting（小鼠IgG） DAB法顯色試劑盒
 

貨號：
SW1010 Western blotting (小鼠 IgG)DAB 顯色試劑盒
SW1020 Western blotting (兔 IgG)DAB 顯色試劑盒
SW1030 Western blotting (山羊 IgG)DAB 顯色試劑盒
SW1040 Western blotting(小鼠/兔 IgG)DAB 顯色試劑盒

產(chǎn)品內(nèi)容：
    1. 封閉試劑 30g。
    2. 10 倍濃縮抗體稀釋液  50ml。
    3. HRP 標記二抗，  0.5ml，效價 1：500-3000。
    4. 20 倍 DAB 濃縮顯色液，5mlA+5mlB。
 

保存：
    -20℃避光密閉保存，一年有效。若經(jīng)常使用，可將封閉試劑，抗體稀釋液和 20 倍 DAB 顯色液 B 存放于2-8℃以方便使用。

產(chǎn)品簡介：
    SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色以檢測電泳分離的特異性的蛋白。

    經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。Western blotting 檢測系統(tǒng)除需要過氧化物酶標記的各種二抗外，還需要配套的顯色試劑。索萊寶提供DAB顯色和ECL化學(xué)發(fā)光兩種試劑及相應(yīng)試劑盒。

操作步驟：(僅供參考)
常規(guī)電泳轉(zhuǎn)膜后:
     1) 清洗轉(zhuǎn)印膜：將膜剝離下后，作好標記，一般在左上角剪一缺口。室溫用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min,以盡量洗去轉(zhuǎn)印膜上的 SDS，防止影響后面的抗體結(jié)合。
     2) 按 5g 封閉試劑加 100ml 雙蒸水計，配制膜封閉液，配好的膜封閉液為乳白色懸液，將漂洗過的轉(zhuǎn)印膜，封閉液內(nèi)，搖床震動，室溫封閉 30min。用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 5min。
     3) 將 10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成 1× （10ml 10×抗體稀釋液加入 90ml 雙蒸水， 混勻， 可 4℃保存三個月） 。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。
     4) 用 1×的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育或 37℃搖動孵育 2h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步將膜沿電泳方向剪成條，分別作好標記，分開孵育。
     5) 用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 5min。
     6) 用稀釋好的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量，按 10ml 抗體稀釋液加入 10ul HRP 標記二抗的比例，配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃搖動孵育 1h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。
    7) 用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 10min。
    8) 配制 DAB 顯色：根據(jù)用量，取 TBS-T 4ml，加入 DAB 顯色液 A、DAB 顯色液 B 各 200ul，混勻，加在膜正面，室溫下顯色。在目標條帶顯出后，而且背景未出時，放入水中終止顯色。

注意事項：
    1. 請根據(jù)一抗來源選擇試劑盒。
    2. western blotting DAB 顯色法操作簡單， 但其敏感性與 ECL 發(fā)光發(fā)有一定的差距， 一般只適用于豐度較高的蛋白。
    3. 可以根據(jù)顯色結(jié)果來優(yōu)化實驗反應(yīng)時間。如背景過深，可延長膜封閉時間，加長終漂洗次數(shù)與時間。如果條帶過弱，可延長抗體孵育時間。
    4. 如果*沒有條帶，請檢查前期蛋白處理及實驗過程， 如果確認無誤，反復(fù)兩次依舊無結(jié)果，請換用 ECL發(fā)光法顯色。
    5. TBS-T（0.01M）配制方法：稱取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的雙蒸水溶解，用鹽酸調(diào) PH 到 7.6，再加入 0.5ml Tween－20，用雙蒸水 加 1000ml，混勻即可。 （也可按照自己的配制習(xí)慣來配制）
 

相關(guān)產(chǎn)品：

D1060  10× 電泳轉(zhuǎn)移緩沖液
A1800  抗體稀釋液（普通型）
T1081-500 10*TBST
SW3010 膜封閉液
SW3020 膜再生液
PE0010 ECL Plus 熒光檢測試劑 (ECL 超敏發(fā)光液 )
SW2010 Western blottingECL 化學(xué)發(fā)光法檢測試劑盒

Western blotting（小鼠IgG） DAB法顯色試劑盒訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。