黃曲霉毒素B1ELISA試劑盒的樣本前處理步驟

更新時間：2012-11-13

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黃曲霉毒素B1ELISA試劑盒

樣本前處理步驟

實驗準備：配制60 %甲醇水溶液（v/v，60：40）和20 %甲醇水溶液（v/v，20：80）。

注意：請配制上述溶液，以免影響檢測的準確性。

1 . 脂肪含量低的固體樣品（如大米、玉米、小麥和飼料等）

1、稱取5 g 粉碎樣品于100 mL帶塞三角瓶內，準確加入25 mL 60%甲醇水溶液。

2、將加入了甲醇水溶液的樣品放入振蕩器內（或用手強力振蕩），充分振蕩3 min后，用濾紙過濾，收集濾液。

3、取濾液2 mL，加入6 mL 20 %甲醇水溶液，混勻，用whatman 1號濾紙過濾，此為樣品待檢液。

2．醬油、醋

1、稱取5 g樣品于25 mL小燒杯中，用10 mL蒸餾水將試樣轉移到125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞輕輕振搖3 min，靜置分層。

2、放出下層三氯甲烷層，取5 mL于20 mL蒸發(fā)皿中，65 ℃水浴通風揮干。揮干冷卻后，準確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發(fā)皿中的凝結物充分溶解。

3、取溶解液2 mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。

3．食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）

1、稱5 g油樣于25 mL小燒杯中，用20 mL石油醚或正乙烷分次將試樣轉移125 mL分液漏斗中，準確加入25 mL 60%甲醇水溶液溶液，加塞輕輕振搖5 min，靜置分層，放出下層60%甲醇水提取液。

2、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。

4．酒類

1、稱取5 g樣品于125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞輕輕振搖3 min，靜置分層。

2、放出下層三氯甲烷層，取5 mL于20 mL蒸發(fā)皿中，65 ℃水浴通風揮干。揮干冷卻后，準確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發(fā)皿中的凝結物充分溶解。

3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。

5．花生

1、樣品去殼粉碎，稱取5 g于100 mL具塞三角瓶中。加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷（或石油醚），振搖10 min，用whatman 1號濾紙過濾。

2、收集濾液于125 mL分液漏斗中，靜置分層后放出下層60%甲醇水提取液。

3、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，再用whatman 1號濾紙過濾，此為樣品待檢液。

6．月餅、桃酥、花生醬等

1、稱取5 g粉碎樣品于125 mL具塞三角瓶中，準確加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷（或石油醚）加塞震蕩10 min，過濾，收集濾液于分液漏斗中，靜置分層。

2、待下層甲醇水溶液澄清后，放出甲醇水溶液于另一三角瓶中。吸取10 mL甲醇水提取液于125 mL分液漏斗中，加入20 mL三氯甲烷，加塞輕輕振搖3 min，靜置分層。放出下層三氯甲烷層，取10 mL于20 mL蒸發(fā)皿中，65 ℃水浴通風揮干。揮干冷卻后，準確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發(fā)皿中的凝結物充分溶解。

3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。

7．面粉、飼料濃縮料

1、稱取5 g樣品于125 mL具塞三角瓶中，準確加入25 mL 60%甲醇水溶液加塞震蕩10 min，過濾，收集濾液。

2、吸取10 mL濾液于125 mL分液漏斗中，加入20 mL三氯甲烷，加塞振搖3 min，靜置分層。放出下層，取10 mL于20 mL蒸發(fā)皿中，65 ℃水浴通風揮干。揮干冷卻后，準確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發(fā)皿中的凝結物充分溶解。

3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。

注意：

1、某些樣品待檢液（如花生等）久置會影響檢測結果的準確性，為保證檢測的準確性，樣品提取后請即時檢測。

2、若樣品待檢液不立即檢測，請將其存儲于棕色玻璃瓶內，2-8 ℃避光保存。

3、 試劑盒在使用前，請將試劑盒內所有試劑放到室內溫度（20-25 ℃）進行溫度平衡；試劑用完后立即將其放置回2-8 ℃冰箱內保存。

4、在每個步驟操作時，速度要快，不要將板孔暴露在空氣中時間過久，避免酶標板變干。未用完的酶標板需密閉于自封帶內，防止受潮且避光保存于2-8 ℃冰箱內。

5、溫育時，需避光，建議將酶標板置于濕盒內（在有蓋容器內放置一塊平整濕紗布）進行溫育。

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