衍生化試劑盒（Derivatization Kit）是一種預先配制好的實驗工具包（基于C18色譜柱研發(fā)的方法），包含特定化學試劑、HPLC中被檢測物質(zhì)的所需流動相、反應(yīng)條件說明和操作流程，用于對待測化合物（如氨基酸、糖類、生物胺等）進行化學衍生化處理（不包含從原料中提取目標物質(zhì)的提取液）。其核心目的是通過化學反應(yīng)在目標物質(zhì)結(jié)構(gòu)上引入特定功能基團，以增強其檢測靈敏度、穩(wěn)定性或色譜分離性能。

工作原理

衍生化的本質(zhì)是通過化學反應(yīng)改變目標物質(zhì)的化學結(jié)構(gòu)，通常分為以下步驟：

選擇衍生化試劑

根據(jù)目標物質(zhì)和檢測需求選擇試劑（如丹磺酰氯、鄰苯二甲醛）。

反應(yīng)條件控制

pH調(diào)節(jié)：例如，氨基酸衍生化需在堿性條件下進行。

溫度與時間：加熱加速反應(yīng)。

反應(yīng)類型

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烷基化反應(yīng)：增加揮發(fā)性。

熒光標記：丹磺酰氯與伯胺反應(yīng)生成熒光衍生物。

終止：通過調(diào)節(jié)pH或加入終止劑（如鹽酸）停止反應(yīng)。

示例

氨基酸分析：使用鄰苯二甲醛（OPA）在堿性條件下與伯胺反應(yīng)，生成熒光產(chǎn)物，便于HPLC-FLD檢測。

衍生化試劑盒功能與應(yīng)用

01 功能

提高檢測靈敏度：通過引入熒光基團、紫外吸收基團或電化學活性基團，使原本難以檢測的化合物（如無紫外吸收的糖類）可被儀器（如HPLC、GC、LC-MS）識別。

改善分離性能：增加化合物的揮發(fā)性（用于GC）或極性（用于HPLC），優(yōu)化色譜分離效果（不用特定的氨基柱、糖分析柱，用C18色譜柱也能對物質(zhì)進行精準定性定量）。

保護不穩(wěn)定化合物：對易氧化、易水解的分子（如某些藥物代謝物）進行衍生化，提高其穩(wěn)定性。

標準化操作：簡化實驗流程，減少人為誤差，適用于高通量檢測。

02 應(yīng)用實例

玉米中的氨基酸分析：將玉米中的氨基酸提取出來，然后將提取物通過衍生化試劑盒衍生，然后進行高效液相檢測。