細胞培養(yǎng)是生命科學研究的重要方法之一。同時，在原代細胞培養(yǎng)的過程中，要任務是從組織中分離細胞。但看似簡單的細胞分離和培養(yǎng)技術，卻不知難倒了多少英雄好漢。下面索萊寶和大家聊聊細胞分離與培養(yǎng)那些事兒。

    如何分離細胞？  

從原代組織中分離細胞，將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。然而，為了更好地測定細胞免疫功能，我們需要從動物外周血或組織中獲取有活性的細胞，如淋巴細胞、單核細胞、粒細胞等。分離這類免疫細胞的方法有：密度梯度離心法、黏附分離法、流式細胞儀分離法等其他分離法。目前常用的是密度梯度離心法。索萊寶細胞分離液產(chǎn)品的研發(fā)原理就是基于不同細胞的密度差異，通過離心使一定密度的細胞按相應密度梯度分布。

    具體怎么實現(xiàn)呢？ 

以分離人外周血淋巴細胞為例：

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液，將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。

3. 室溫，水平轉子500~1000g，離心20~30min。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層，離心管底部是紅細胞與粒細胞。

5. 小心地吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g，離心10min。

6. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。

7. 重復步驟6。

8. 棄上清，細胞重懸備用。

   細胞分離時別忘了做到這些！ 

1. 無菌操作：在樣品收集和分離過程中，應注意無菌操作，避免微生物污染。

2. 保證新鮮：血液樣本要為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），避免冷凍和冷藏，抗凝劑優(yōu)先選擇為EDTA、枸櫞酸和肝素。

3. 分離液的保存：分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預熱。

4. 細胞稀釋及細胞洗滌液：稀釋或洗滌細胞不可使用含鈣離子、鎂離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。

5. 注意添加順序：樣品在上，分離液在下，保持兩液面界面清晰。

6. 離心管：選用玻璃材質(zhì)離心管。部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。

7. 離心：血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉數(shù)和離心時間，摸索適宜的分離條件。

   如何選擇細胞分離液產(chǎn)品？ 

1.要有針對性地選擇產(chǎn)品。不同細胞的密度與體積是不同的，不同種屬動物細胞的密度也是不同的。索萊寶針對不同客戶科研需求，研發(fā)了不同種細胞的分離液，如：淋巴細胞分離液、粒細胞分離液、白細胞分離液和單個核細胞分離液；針對不同種屬動物，研發(fā)了不同動物的細胞分離液，如：人、小鼠、大鼠、雞、兔、牛、狗等等。同時，索萊寶細胞分離液系列產(chǎn)品滿足了外周血、組織臟器、骨髓等不同樣品的分離。索萊寶豐富多樣的產(chǎn)品滿足了客戶的多種科研需求。2. 要選擇分層效果明顯的產(chǎn)品。索萊寶細胞分離液產(chǎn)品，性價比高，分層效果明顯。以人外周血淋巴細胞分離液為例，索萊寶分離液產(chǎn)品分離的白膜層非常清晰，而且白膜層沒有彌散，效果優(yōu)于其他品牌同類產(chǎn)品。3.要選擇細胞沉淀純度高的產(chǎn)品。使用索萊寶的細胞分離液產(chǎn)品得到的淋巴細胞較為純凈，紅細胞污染極少，純度大于90%。比其他品牌分離液分離的效果都好。

千辛萬苦得到的細胞

以為大功告成？

接下來是細胞培養(yǎng)

*長征才剛剛開始

稍不注意

一下回到解放前！

    細胞培養(yǎng)要注意哪些？   

無菌的環(huán)境與操作：在細胞培養(yǎng)的過程中，應保持無菌的實驗環(huán)境并進行無菌操作。

培養(yǎng)液的選擇：每種細胞應該選擇適合它的培養(yǎng)液。索萊寶的多種細胞培養(yǎng)液產(chǎn)品滿足了不同細胞的需求。

溫度與pH值的監(jiān)控：一般選擇37℃和5% CO2培養(yǎng)體系。細胞培養(yǎng)液偏黃色的時候應及時更換培養(yǎng)液。

預熱培養(yǎng)液：為了使細胞更好地貼壁，應注意提前預熱培養(yǎng)液。

避免培養(yǎng)液暴露在熒光下：平時應注意將培養(yǎng)液儲存在黑暗的環(huán)境中，熒光（紫外光）對于培養(yǎng)液（有細胞或無細胞）有不利影響。

傳代接種密度：在細胞傳代的過程中要保證合適的接種密度。通過細胞計數(shù)來控制細胞傳代的接種密度。同時，要注意觀察細胞的狀態(tài)和生長速度。

避免細胞損傷：在細胞消化傳代時，應注意胰蛋白酶的濃度以及消化的時間。輕柔地吹打細胞，避免機械損傷，選擇適當?shù)碾x心力。

細胞凍存與復蘇：凍存液中要加入保護劑：甘油或二甲基亞砜（DMSO）。凍存時要進行梯度降溫。細胞復蘇選擇在37℃的水溶液中進行，解凍細胞速度要快。解凍后，細胞凍存管外壁要用紙擦干，避免污染。

  聚力，*，巨劃算  

感恩有你，真情回饋。索萊寶為答謝廣大客戶的支持，2019.7.1-8.15期間進行細胞分離液買二送一活動！助力科研，品質(zhì)值得信賴！心動不如行動，機會千載難逢，還不快快下單！

總得來說

細胞分離和培養(yǎng)是個細致活

方方面面都需您注意

希望這些要點可以幫助到您！

索萊寶愿陪在您身邊，助您成功！